【高分文献】P2Y14R作为炎症性肠病的潜在治疗靶点

结果1：肠上皮细胞的P2Y₁₄R参与调节人类IBD和DSS诱导的实验性结肠炎

为了研究P2Y₁₄R在IBD发病机制中的潜在作用，首先分析了公开数据集中 UC 患者肠道活检组织中 P2Y14R的表达情况。结果表明，IECs 中的 P2Y₁₄R 可能在 UC 的发展过程中起着关键作用。

为了进一步深入探讨 P2Y₁₄R 在肠上皮中的参与，研究者培育了在IEC特异性 P2Y₁₄R基因敲除（P2Y₁₄R^ΔIEC）小鼠。然后，用3%DSS刺激P2Y₁₄R^fl/fl和 P2Y₁₄R^ΔIEC小鼠。研究发现IECs特异性P2Y₁₄R基因敲除不会影响接受标准饮用水的小鼠的体重、疾病活动指数（DAI和结肠长度。然而，与P2Y₁₄R^fl/fl小鼠相比，P2Y₁₄R^ΔIEC小鼠在接受DSS处理后体重减轻、腹泻和直肠出血的情况有所缓解。同时，与 P2Y₁₄R^fl/fl小鼠相比，P2Y₁₄R^ΔIEC小鼠的直肠缩短、肠道通透性增加、脾脏指数以及组织学损伤均较小（图1h-k）。

这些结果有力地表明，肠上皮细胞的 P2Y₁₄R 参与了 IBD 的发展。

结果2：肠上皮细胞的P2Y₁₄R可调控上皮细胞坏死

结果3：P2Y₁₄R通过RIPK1/RIPK3通路调控肠上皮细胞的坏死

据报道，RIPK1和RIPK3的结合可启动坏死体复合物的形成。因此，RIPK1/RIPK3通路与MLKL一起被认为是坏死程序和坏死相关疾病的核心组成部分。

实验结果表明，P2Y14R 通过 RIPK1/RIPK3 通路调控肠上皮细胞的坏死。

结果4：P2Y₁₄R通过抑制CREB与Ripk1启动子的DNA结合能力促进IEC的坏死

为了探索P2Y₁₄R调控Ripk1转录的上游分子机制，利用在线预测网站（Human TFDB、GTRD和UCSC）预测和筛选出可能与Ripk1启动子结合的潜在转录因子（TFs）——CREB。为了证实 CREB 与 Ripk1 启动子之间的结合，进行了ChIP检测。

通过体内和体外实验证实，P2Y₁₄R通过抑制CREB与Ripk1启动子的 DNA 结合能力，促进了IECs的坏死。

结果5：P2Y₁₄R通过调节cAMP/PKA/CREB途径介导Ripk1的转录

结果6：UDP-葡萄糖通过激活P2Y₁₄R促进IECs坏死

根据GEO数据集的分析，UC中P2Y14R信号级联的活性可能不是由于细胞内 UDPG 的积累。IBD患者肠黏膜中Ugp2和Gys1的表达量减少，在DSS患者的IECs中也观察到了这些变化。

为了验证这一假设，通过实验发现UDP葡萄糖的积累可能部分参与了P2Y₁₄R调控IBD中IEC坏死的激活。通过实验发现，服用UDPG会加重DSS诱导的体重下降、腹泻和直肠炎。UDPG-P2Y₁₄R轴通过调节IECs的坏死参与了DSS诱导的炎症调控。

结果7：发现具有预期效力和结合亲和力的P2Y₁₄R拮抗剂

为了寻找一种具有良好拮抗活性和结合亲和力的P2Y₁₄R拮抗剂，以进一步验证P2Y₁₄R在IECs坏死和IBD中的作用，通过结合位点的细化、虚拟筛选、化学优化和体外实验，通过直接结合P2Y₁₄R位点，开发出了强效的P2Y14R拮抗剂HDL-16。

结果8：药理抑制 P2Y₁₄R 可改善 DSS 诱发的结肠炎

通过HDL-16拮抗剂处理DSS诱导的肠炎模型，结果显示每日使用HDL-16或PPTN治疗可显著抑制小鼠结肠炎症状，并维持小鼠肠道屏障的完整性。

总之，P2Y₁₄R拮抗剂可通过抑制IEC坏死和保护黏膜屏障功能来改善DSS诱导的结肠炎。

参考文献：

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[2] Sudhakar, P. et al. Holistic healthcare in inflammatory bowel disease: time for patient-centric approaches? Gut 28, gutjnl-2022–328221 (2022).

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